觀察麝香保心丸對(duì)老年動(dòng)脈粥樣硬化患者的影響論文
環(huán)氧化酶2 通過(guò)活化的巨噬細(xì)胞調(diào)節(jié)前列腺素的合成，與炎癥和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生有關(guān)。本研究旨在觀察麝香保心丸對(duì)老年亞臨床動(dòng)脈粥樣硬化患者外周血單核細(xì)胞環(huán)氧化酶2 表達(dá)的影響，闡釋麝香保心丸具有一定的抗炎作用，更有利于防治老年亞臨床動(dòng)脈粥樣硬化患者發(fā)生心肌缺血而致心絞痛、胸悶及心肌梗死等。
1 資料與方法
1.1 研究對(duì)象
選擇我院2012 年3 月至2013 年2 月的34 例老年亞臨床動(dòng)脈粥樣硬化患者，男性19 例，女性15 例，年齡67～79歲，平均(71±7)歲。納入條件：經(jīng)高分辨超聲檢測(cè)到頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度(IMT)增厚(IMT≥1.0 mm)，知情同意者。排除條件：動(dòng)脈血管嚴(yán)重粥樣硬化狹窄、嚴(yán)重肝、腎疾病、結(jié)締組織疾病、腫瘤、感染、高熱，近期服用抗生素、非甾體消炎藥等患者。
1.2 方法
1.2.1 超聲心動(dòng)圖檢查：采用Sono5500 型彩色超聲心動(dòng)圖儀，測(cè)量頸總動(dòng)脈和椎動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度IMT，IMT≥1.0 mm 即為IMT 增厚。
1.2.2 采血和細(xì)胞分離及培養(yǎng)：服用麝香保心丸前和30 d 后分別采入選老年亞臨床動(dòng)脈粥樣硬化患者外周靜脈血20 ml于無(wú)菌抗凝管中，用等倍稀釋Hank′s 液，制成細(xì)胞懸液;把淋巴細(xì)胞分離液加到透明無(wú)菌的離心管中(體積為細(xì)胞懸液體積的一半)，再將細(xì)胞懸液緩慢地加在分離液上面;使用2 000 r/min 離心20 min，用毛細(xì)吸管吸取中間的乳白色層于另一無(wú)菌離心管中;用5 倍體積的Hank′s 液重復(fù)離心洗滌2次，用RPMI 1640 培養(yǎng)液離心洗滌1 次，每次離心速度為1 500r/min，離心10 min，將洗滌后的細(xì)胞沉渣加入1 ml 含10%胎牛血清的完全1640 培養(yǎng)液，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并用2%錐蟲(chóng)藍(lán)染色，計(jì)數(shù)活細(xì)胞，活細(xì)胞>95%;用RPMI 1640 培養(yǎng)液稀釋，置于4 個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)孔中，每孔細(xì)胞數(shù)調(diào)定為1×107 個(gè)，37℃、5%CO2孵育箱中培養(yǎng)6 h，去除上清液，得到貼壁的單核細(xì)胞;各孔加入RPMI 1640 培養(yǎng)液5 ml 和脂多糖5 μg(終濃度1 mg/L)，37 ℃、5%CO2孵育箱中培養(yǎng)24 h 后收集貼壁細(xì)胞。
1.2.3 單核細(xì)胞總RNA 提取和RT-PCR 擴(kuò)增：購(gòu)買TAKARA 公司RTPCR 試劑盒，環(huán)氧化酶引物由上海博亞生物技術(shù)有限公司合成。用Trizol 方法提取單核細(xì)胞總RNA，按RT-PCR 試劑盒說(shuō)明書(shū)逐步進(jìn)行操作，將RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA 后，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增(用來(lái)擴(kuò)增基因片斷)。上游引物，下游引物，擴(kuò)增片斷為342 bp。內(nèi)參照Cyclophin 上游引物和下游引物，擴(kuò)增片段206 bp。用94 ℃預(yù)變性3 min 后，再94 ℃變性50 s，55 ℃退火50 s，72 ℃延伸1 min，共38 個(gè)循環(huán)，72℃延伸10 min。PCR 產(chǎn)物采用1.5% 瓊脂糖凝膠電泳，在掃描分析儀上進(jìn)行產(chǎn)物半定量分析，以環(huán)氧化酶2 的相對(duì)吸光度值表示，環(huán)氧化酶2 的相對(duì)吸光度值=環(huán)氧化酶2 吸光度值/Cyclophin 吸光度值。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPPS12.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用t 檢驗(yàn)，以x±s 表示，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
服用麝香保心丸前和30 d 后，入選老年亞臨床動(dòng)脈粥樣硬化患者外周血單核細(xì)胞環(huán)氧化酶2 mRNA 表達(dá)水平的比較：34 例治療前為1.58±0.22，治療后為0.76±0.14，治療前后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3 討論
亞臨床動(dòng)脈粥樣硬化也稱動(dòng)脈粥樣硬化臨床前期病變，是指已有動(dòng)脈粥樣硬化的客觀證據(jù)，尚無(wú)重要的動(dòng)脈血管(如冠狀動(dòng)脈、腦動(dòng)脈、腎動(dòng)脈及外周動(dòng)脈)嚴(yán)重粥樣硬化狹窄導(dǎo)致明確的臨床癥狀和證據(jù)的情況，這部分患者具有較高的心腦血管事件或其他嚴(yán)重血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化臨床前期病變積極早期干預(yù)有重要意義。本研究結(jié)果表明，老年亞臨床動(dòng)脈粥樣硬化患者外周血單核細(xì)胞環(huán)氧化酶2 mRNA 表達(dá)明顯較高(環(huán)氧化酶2 的相對(duì)吸光度值高達(dá)1.58±0.22)，支持環(huán)氧化酶2 參與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展過(guò)程的觀點(diǎn)。環(huán)氧化酶2 還與前列腺素產(chǎn)物增加等有關(guān)，前列腺素產(chǎn)物能增加血管滲透性，促進(jìn)單核細(xì)胞黏附，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞化學(xué)趨化性，促進(jìn)巨噬細(xì)胞遷移，刺激炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生，激活基質(zhì)金屬蛋白酶，并使白細(xì)胞和血小板活化。麝香保心丸主要成分麝香人參提取物牛黃肉桂蘇合香蟾酥冰片，具有芳香溫通益氣強(qiáng)心是心肌缺血引起的心絞痛胸悶及心肌梗死的安全有效的常用藥，能明顯降低動(dòng)脈粥樣硬化患者的病死率和心腦血管事件發(fā)生率。本研究結(jié)果表明，采用麝香保心丸對(duì)老年亞臨床動(dòng)脈粥樣硬化患者外周血單核細(xì)胞體外干預(yù)，能顯著降低老年亞臨床動(dòng)脈粥樣硬化患者外周血單核細(xì)胞環(huán)氧化酶2 mRNA 表達(dá)[服用麝香保心丸30 d 后環(huán)氧化酶2 的相對(duì)吸光度值恢復(fù)至0.76±0.14 與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)]，說(shuō)明麝香保心丸還具有抗炎等作用，更有利于防治老年亞臨床動(dòng)脈粥樣硬化患者發(fā)生心肌缺血而致心絞痛、胸悶及心肌梗死等。
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