蘇木精染液的染色力測(cè)定與評(píng)價(jià)
蘇木精染液的染色力主要受蘇木精的氧化狀態(tài)影響，氧化不足或過(guò)度氧化均可影響其染色力，下面是小編搜集整理的一篇探究蘇木精染液的染色力測(cè)定與評(píng)價(jià)的論文范文，歡迎閱讀參考。
蘇木精染液的染色力是影響HE染色成功的關(guān)鍵因素之一，而染色力隨染色時(shí)間和切片數(shù)量的增加呈進(jìn)行性下降。實(shí)際工作中技術(shù)人員大多依據(jù)個(gè)人經(jīng)驗(yàn)來(lái)決定蘇木精染液是否需要更換，缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，造成批間差異大。本文通過(guò)測(cè)定蘇木精染液使用過(guò)程中pH值的變化來(lái)確定染液的酸度值，評(píng)價(jià)蘇木精染液的染色力，為實(shí)際工作中蘇木精染液的更換提供量化參考指標(biāo)，從而更好地開展HE染色的質(zhì)量控制。
1材料與方法
1.1蘇木精染液的配制采用常規(guī)使用的改良Lillie-Mayer蘇木精染液，具體配制方法如下[1]:蘇木精5g溶于50ml無(wú)水乙醇，50g硫酸鋁鉀充分溶于650ml蒸餾水后與蘇木精無(wú)水乙醇液充分混合，加入500mg碘酸鈉，最后加入甘油300ml和冰醋酸20ml,室溫靜置1周后備用。
1.2儀器實(shí)驗(yàn)所用染色機(jī)為L(zhǎng)eicaAutostainerXL,pH值測(cè)定計(jì)為sartoriusPB-10.
1.3方法隨機(jī)挑選胃、腸、肺、淋巴結(jié)、乳腺、肝等組織蠟塊，共10塊，每個(gè)蠟塊連切18張切片備用;用新蘇木精染液行常規(guī)HE染色，分別選取第0、500、1000、1500、2000、2500張切片時(shí)測(cè)量染液的pH值，每一時(shí)間點(diǎn)同步選取實(shí)驗(yàn)備用片進(jìn)行染色，并更換新的分化液和藍(lán)化液;更換蘇木精染液后重復(fù)本實(shí)驗(yàn)2次。每批次所染切片均由2名高年資病理醫(yī)師與一名技術(shù)主管同時(shí)對(duì)所染切片進(jìn)行評(píng)價(jià)，每張切片3者評(píng)價(jià)結(jié)果必須一致，評(píng)價(jià)結(jié)果不一致的切片均算不合格片，每一批10張切片中有4張切片染色評(píng)價(jià)不合格即可確定染液的染色力不夠需更換。
2結(jié)果
2.1pH值與染色切片數(shù)量的關(guān)系3次實(shí)驗(yàn)中，隨著染色切片數(shù)量的增加，染液的pH值也在逐步升高。3次實(shí)驗(yàn)中同一時(shí)間點(diǎn)染液pH值的均值與染色切片數(shù)量的關(guān)系見表1.
2.2pH值與蘇木精染液染色力的關(guān)系不同批次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，蘇木精染液染色力在染液pH值1.51~1.87間變化小，隨著染色切片數(shù)的增加，染液pH值逐漸升高，而染色力不斷下降;第2、3次實(shí)驗(yàn)中，染液累積染色切片至2500,pH值分別達(dá)到2.65和2.71時(shí)，染色合格片分別只有6和4張(表2).
3討論
蘇木精-伊紅(HE)染色是組織與細(xì)胞學(xué)最常用的染色方法之一，蘇木精染液的染色力是影響HE染色成功的關(guān)鍵因素。蘇木精染液的染色力主要受蘇木精的氧化狀態(tài)影響，氧化不足或過(guò)度氧化均可影響其染色力。各類蘇木精染液配制方法的區(qū)別主要在氧化方法的選擇及氧化劑用量上。蘇木精染液配制過(guò)程中加入醋酸主要是調(diào)節(jié)染液pH值，當(dāng)pH值處于合適范圍時(shí)，不僅可以抵消氧化劑的過(guò)度氧化、促進(jìn)氧化蘇木精(即蘇木紅)與鋁鹽結(jié)合形成藍(lán)色色淀、還可維持細(xì)胞核呈酸式電離，增強(qiáng)細(xì)胞核的選擇性著色，減少蘇木精沉渣與氧化膜的形成[1].不同方法配制的蘇木精染液初始pH值可能不盡相同，但確保蘇木精染液的酸性環(huán)境和穩(wěn)定染液的pH值對(duì)蘇木精染液的染色力尤為重要。蘇木精染液染色力隨切片數(shù)量的增加呈漸進(jìn)式下降，其可能的原因：①染液染色過(guò)程中蘇木精不斷氧化;②現(xiàn)行HE染色不論是手工還是儀器，大多采用浸染式染色方法，切片脫蠟至水化進(jìn)入蘇木精染液前不可避免地帶入一些自來(lái)水，隨著染液的累積使用，使染液的pH值逐漸升高，染液的顏色和染色力隨之也不斷變化[2].為了盡可能減少由于染液的累積使用而導(dǎo)致染液pH值升高，有研究者在切片進(jìn)入蘇木精染液前先用2%冰醋酸水溶液或10%檸檬酸水處理，以避免切片水洗后帶入自來(lái)水，很好地穩(wěn)定了染液的pH值，延長(zhǎng)了蘇木精染液的使用時(shí)間[3].本研究3次重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果顯示：隨蘇木精染液的累積使用染液pH值不斷升高;染液pH值維持在一定范圍內(nèi)時(shí)染液的染色力穩(wěn)定，pH值超出范圍后染色力即明顯下降，說(shuō)明需要更換染液。
參考文獻(xiàn)：
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